使用 Agilent 8860 氣相色譜儀快速分析37種FAME

更新時間：2019-06-06 點擊次數：3128

摘要?
?        使用配備分流/不分流進樣口和火焰離子化檢測器 (FID) 的 Agilent 8860 氣相色譜儀分析 37 種脂肪酸甲酯 (FAME) 混標和蛋白水解配方奶的實際樣品。本應用簡報介紹了 37 種 FAME 混合物的分析，分析速度比 GB 5009.168-2016 更快，可實現出色分離。
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?前言
        脂肪酸是中性脂肪、磷脂和糖脂的主要成分。脂肪酸可以分為三類：飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸。有些脂肪酸是必需脂肪酸（如亞油酸），這類脂肪酸無法由身體合成，只能從食物中獲得。ω-3 和 ω-6 脂肪酸屬于多不飽和脂肪酸，在人體營養中發揮著關鍵作用，其中包括花生四烯酸 (ARA)、二十碳五烯酸 (EPA) 和二十二碳六烯酸 (DHA)。ω-3 脂肪酸可以預防心臟病和高血壓等疾病。脂肪在營養和食品化學領域具有非常重要的作用。
?        水解和甲基化是常用的脂肪酸測定方法；脂肪酸的酯化可降低極性，促進不飽和異構體的分離。脂肪酸甲酯 (FAME) 的分析是食品分析中重要的應用之一。
        ?GB 5009.168-2016 規定了食品中 37 種脂肪酸的測定。本方法詳細描述了樣品預處理和氣相色譜 (GC) 參數，該方法建議使用強極性氰丙基聚硅氧烷型色譜柱 (100 m × 0.25 mm, 0.2 µm)。該方法可在 82 分鐘內分離 37 種 FAME。之前的安捷倫應用簡報表明，使用配備 Agilent J&W DB-FastFAME Intuvo 氣相色譜柱的 Agilent Intuvo 9000 氣相色譜系統以氦氣作為載氣，可在 8 分鐘內分離 37 種 FAME2 。這種快速分析得益于 Intuvo 的直接加熱技術，該技術可使色譜柱以 250 °C/min 的升溫速率加熱。
?        本應用簡報介紹了采用兩種長度的 DB-FastFAME 色譜柱、以氮氣為載體的 8860 氣相色譜系統方法，該方法相對較快。測定了峰面積的 RSD，并對 ARA、 EPA、DHA 等關鍵的中性脂肪進行了定量分析。為證明該方法的適用性，本應用還對嬰兒配方奶樣品進行了分析。
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?實驗部分
?試劑與標準品
?        37 組分 FAME 混標（部件號 CDAA252795-MIX-1 mL）以及 C20:4n6（部件號 CDAA-253207M-10 mg）、C20:5n3（部件號 CDAA-253209M-10 mg）和 C22:6n3 （部件號 CDAA-253228M-10 mg）的單標準品均購自上海安譜科學儀器有限公司。混標中各組分的濃度為 200–400 mg/mL。
?        嬰兒配方奶樣品購自當地。根據 GB 5009.168-2016 進行樣品預處理。
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?儀器
?        使用配備火焰離子化檢測器 (FID) 的 8860 氣相色譜儀分析 FAME。使用配備 5 µL 進樣針和分流/不分流進樣口的 Agilent 7693A 自動液體進樣器進樣。表 1 和表 2 列出了儀器和條件。
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結果與討論
? 圖 1 為 30 m DB-FastFAME 色譜柱上獲得的 37 組分 FAME 混標的典型色譜圖。在某些應用中，順式和反式 C18:1、順式和反式 C18:2、C22:0、C20:3、C22:6、 C24:1 可能發生共流出，導致峰歸屬出現問題。如圖 1 所示，8860 氣相色譜系統使用表中條件，37 種化合物都得到了完全分離，峰形尖銳對稱且運行時間縮短至 24 分鐘以內。特別值得注意的是分離順-反異構體以及 EPA 和 DHA 組分的能力。該方法對于復雜混合物中脂肪酸的定量分析非常有用，特別是測定魚油等基質中的 EPA 和 DHA。與 0.18 mm 內徑色譜柱相比，這種 30 m × 0.25 mm, 0.25 µm 色譜柱內徑較大、膜厚較厚，具有更大的色譜柱容量和更長的色譜柱壽命。蛋白水解配方奶是對牛奶過敏嬰兒的良好選擇，按水解程度可分為三種類型：部分水解配方奶、深度水解配方奶和氨基酸配方奶。圖 2–4 顯示三種不同類型蛋白水解配方奶的分析結果。包括 C18:2n6、 C18:3n3、ARA、DHA 在內的關鍵 FAME 易于檢測和定量。
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? 以 5、10、50、100、250、1000 mg/L 的濃度配制 ARA、EPA 和 DHA 的校準標樣。這三種化合物的相關系數 (R2 ) 均 ≥ 0.9997。圖 5、圖 6、圖 7 顯示了校準曲線。
?對混標進樣六次測試方法重現性。由圖 8 可知，除 C4:0 以外，所有化合物的峰面積 RSD% 均遠低于 1%。這表明 8860 氣相色譜系統是一種可靠的脂肪酸分析系統。
?的 0.18 mm 內徑色譜柱有提高分析效率的潛力，縮短分析時間的同時不損失分析性能。如圖 9 所示，使用這種短色譜柱可實現更快的分析（14 分鐘以內），而分離度幾乎相同。關鍵化合物的分離度值如圖 1 和圖 9 所示。

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?結論
? 本應用簡報證明配備自動進樣器和 FID 的 8860 氣相色譜儀可以為 37 種 FAME 的分析提供更快、更可靠的解決方案。采用兩種專為 FAME 分析設計的毛細管柱；二者均獲得了不降低分離度的出色效率。 30 m DB-FastFAME 色譜柱提供了更大的色譜柱容量和更高的耐用性，而 20 m DB-FastFAME 色譜柱的運行時間更短。容量為 16 個樣品瓶的 7693A 自動進樣器與 8860 氣相色譜儀 EPC 控制確保良好的重現性和操作簡便性，適用于分析快速的食品行業以及常規分析。
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?參考文獻
?1. Zhou, Y.; Wu, H. 改善對 37 種脂肪酸甲酯的分析，安捷倫科技公司應用簡報，出版號 5991-8706ZHCN，2018
?2. Zhou, Y. 快速分離脂肪酸甲酯，安捷倫科技公司應用簡報，出版號 5994-0116ZHCN，2018

來源：安捷倫科技（中國）有限公司